Presentació
La distròfia muscular de Duchenne és la malaltia hereditària lligada al cromosoma X més freqüent en l’home, afectant a 1 de cada 3500 nens nascuts. El debut de la malaltia té lloc entre els 2-4 anys de vida amb una degeneració muscular molt severa. Existeix una forma de la malaltia, la distròfia muscular de Becker, que debuta de forma més tardana i evoluciona més lentament però pot arribar a ser invalidant al llarg de la vida adulta. Tant la distròfia muscular de Duchenne com la de Becker estan causades per mutacions al gen DMD.
El gen DMD, localitzat a cromosoma X, es transcriu per un mRNA de 14kb que dona lloc a una proteïna subsarcolèmica anomenada distrofina. El 70% de les mutacions del gen DMD consisteixen en grans delecions o duplicacions exòniques. El 30% restant de les mutacions el són petits canvis tipus nonsense, frameshift, missense i alteracions de l’splicing.
Serveis
El diagnòstic dels pacients afectats per distròfia muscular de Duchenne o Becker es primerament clínic i es complementa amb l’anàlisi immunohistoquímic i/o Western Blot de la biòpsia muscular amb anticossos dirigits contra la distrofina.
L’estudi molecular del gen DMD comença amb l’anàlisi del nombre de còpies per determinar la presència o absència d’una deleció o duplicació exònica, i en cas de ser negatiu, es procedeix a la seqüenciació de l’ADN genòmic mitjançant tecnologia NGS per a la identificació de possibles mutacions puntuals. Si el resultat és també negatiu, el pacient obtindria el diagnòstic clínic i anatomopatològic però no el diagnòstic genètic, sense el qual el pacient no pot beneficiar-se dels assajos clínics en desenvolupament, especialment aquells que impliquen teràpia gènica.
El pas següent en el procés diagnòstic consisteix en analitzar la seqüència intrònica mitjançant la seqüenciació de l’ARN missatger del gen DMD per identificar:
- Mutacions situades als introns que creen o destrueixen llocs d’splicing, o bé originen la inserció de fragments intrònics a la seqüència codificant.
- Mutacions situades als exons, que són de significat incert o que aparentment poden semblar innòcues, però per les quals la seqüenciació de l’ARN demostra el seu efecte patogènic a nivell transcripcional.
El servei que oferim inclou:
- Extracció d’ARN de la biòpsia muscular del pacient.
- Retrotranscripció a cDNA.
- Seqüenciació mitjançant el mètode Sanger en 26 fragments solapants que cobreixen la totalitat de les 14kb del cDNA del gen DMD.
- Anàlisis de les variants identificades: creació/abolició de llocs d’splicing, detecció de transcrits alternatius, inserció de pseudoexons i valoració del possible efecte que poden tenir les variants de significat incert a nivell transcripcional.
Per dur a terme aquest estudi és indispensable la disponibilitat de biòpsia muscular del pacient.
Responsables
Correu electrònic de contacte: pgallano@santpau.cat
Responsable Científic
Responsable Tècnic / Responsable Gestor
Experiència i Trajectòria
El grup de malaties genètiques, associat al Servei de Genètica de l’hospital de Sant Pau, realitza l’estudi molecular de les malalties neuromusculars de base genética desde l’any 1985, havent-se diagnosticat molecularment des d’aleshores més de 7000 families.
Prova d’aquesta llarga trajectòria i expertesa són els projectes concedits i les publicacions citades a continuació:
- Evidence-Based Consensus and Systematic Review on Reducing the Time to Diagnosis of Duchenne Muscular Dystrophy.
- Segarra-Casas A, Domínguez-González C, Natera-de Benito D, Kapetanovic S, Hernández-Laín A, Estévez-Arias B, Llansó L, Ortez C, Jou C, Martí-Carrera I, López-Márquez A, Rodríguez MJ, González-Mera L, Nedkova V, Fernández-Torrón R, Rodríguez-Santiago B, Jimenez-Mallebrera C, Juntas-Morales R, López-de Munain A, Surrallés J, Nascimento A, Gallardo E, Olivé M, Gallano P, González-Quereda L. Translating Muscle RNAseq Into the Clinic for the Diagnosis of Muscle Diseases. Ann Clin Transl Neurol. 2025 Jul;12(7):1465-1479. doi: 10.1002/acn3.70078. Epub 2025 May 25. PMID: 40413734; PMCID: PMC12257123.
- Segarra-Casas A, Domínguez-González C, Hernández-Laín A, Sanchez-Calvin MT, Camacho A, Rivas E, Campo-Barasoain A, Madruga M, Ortez C, Natera-de Benito D, Nascimento A, Codina A, Rodriguez MJ, Gallano P, Gonzalez-Quereda L. Genetic diagnosis of Duchenne and Becker muscular dystrophy through mRNA analysis: new splicing events. J Med Genet. 2023 Jun;60(6):615-619. doi: 10.1136/jmg-2022-108828. Epub 2022 Dec 19. PMID: 36535754; PMCID: PMC10313949.
- Aartsma-Rus A, Hegde M, Ben-Omran T, Buccella F, Ferlini A, Gallano P, Howell RR, Leturcq F, Martin AS, Potulska-Chromik A, Saute JA, Schmidt WM, Sejersen T, Tuffery-Giraud S, Uyguner ZO, Witcomb LA, Yau S, Nelson SF.
- J Pediatr. 2019 Jan;204:305-313.e14. doi: 10.1016/j.jpeds.2018.10.043.
- PMID: 30579468
- DMD Mutations in 576 Dystrophinopathy Families: A Step Forward in Genotype-Phenotype Correlations.
- Juan-Mateu J, Gonzalez-Quereda L, Rodriguez MJ, Baena M, Verdura E, Nascimento A, Ortez C, Baiget M, Gallano P.
- PLoS One. 2015 Aug 18;10(8):e0135189. doi: 10.1371/journal.pone.0135189. eCollection 2015.
- PMID: 26284620
- Interplay between DMD point mutations and splicing signals in Dystrophinopathy phenotypes.
- Juan-Mateu J, González-Quereda L, Rodríguez MJ, Verdura E, Lázaro K, Jou C, Nascimento A, Jiménez-Mallebrera C, Colomer J, Monges S, Lubieniecki F, Foncuberta ME, Pascual-Pascual SI, Molano J, Baiget M, Gallano P.
- PLoS One. 2013;8(3):e59916. doi: 10.1371/journal.pone.0059916. Epub 2013 Mar 25.
- PMID: 23536893
- Prognostic value of X-chromosome inactivation in symptomatic female carriers of dystrophinopathy.
- Juan-Mateu J, Rodríguez MJ, Nascimento A, Jiménez-Mallebrera C, González-Quereda L, Rivas E, Paradas C, Madruga M, Sánchez-Ayaso P, Jou C, González-Mera L, Munell F, Roig-Quilis M, Rabasa M, Hernández-Lain A, Díaz-Manera J, Gallardo E, Pascual J, Verdura E, Colomer J, Baiget M, Olivé M, Gallano P.
- Orphanet J Rare Dis. 2012 Oct 23;7:82. doi: 10.1186/1750-1172-7-82.
- PMID: 23092449
- Isolated cardiomyopathy caused by a DMD nonsense mutation in somatic mosaicism: genetic normalization in skeletal muscle.
- Juan-Mateu J, Paradas C, Olivé M, Verdura E, Rivas E, González-Quereda L, Rodríguez MJ, Baiget M, Gallano P.
Projectes:
- PI18/01585 Análisis del transcriptoma mediante RNA-Seq en pacientes con patología neuromuscular no resuelta tras secuenciación de exoma: optimización del algoritmo diagnóstico. Pia Gallano y Lidia Gonzalez Quereda. (INSTITUT DE RECERCA DE L'HOSPITAL DE LA SANTA CREU I SANT PAU). 01/01/2019-31/12/2021.
- PI 15/01898 Implementación de la secuenciación masiva en el estudio de las Miopatías Congénitas y los Síndromes Miasténicos congénitos: un modelo de investigación traslacional en enfermedades raras Instituto de Salud Carlos III. Pia Gallano Petit. (INSTITUT DE RECERCA DE L'HOSPITAL DE LA SANTA CREU I SANT PAU). 2015- 2018.
- PI 11/2586 Elaboración de paneles de diagnóstico molecular en patología monogénica hereditaria mediante el sistema de nanofluidos y secuenciación masiva Instituto de Salud Carlos III. (INSTITUT DE RECERCA DE L'HOSPITAL DE LA SANTA CREU I SANT PAU). 2012-2015.
- PI 08/0347 Estudio del RNA mensajero del gen de la distrofia muscular de Duchenne (DMD): Interferencia del mecanismo de degradación de mRNA mediada por mutaciones sin sentido Instituto de Salud Carlos III. Pia Gallano (INSTITUT DE RECERCA DE L'HOSPITAL DE LA SANTA CREU I SANT PAU). 2008-2011.
- PI 05/2457 Interacción de la disferlina con diferentes proteínas de músculo esquelético y búsqueda de genes modificadores que originan la aparición de tres disferlinopatías diferentes (MM, LGMD2B y DAT) Instituto de Salud Carlos III. Pia Gallano (INSTITUT DE RECERCA DE L'HOSPITAL DE LA SANTA CREU I SANT PAU). 2005-2008.CREU I SANT PAU). 2008-2011.
Equipament
Equipament implicat en la realització del servei:
- Tissue Ruptor (Qiagen).
- Termocicladors Veriti™ 96-Well Thermal Cycler (ThermoFisher
- Applied Biosystems 3500 Genetic Analyzer
